PFKL通過(guò)促進(jìn)PLIN2與CPT1A的相互作用，促進(jìn)線(xiàn)粒體偶聯(lián)脂滴的脂解過(guò)程.

第一步，脂滴中確定目標(biāo)蛋白分子

質(zhì)譜檢測(cè)和分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)和脂滴相互作用的線(xiàn)粒體外膜蛋白CPT1A（圖1a）。該蛋白負(fù)責(zé)催化長(zhǎng)鏈脂肪酸輔酶a (CoA)，將?；匏俎D(zhuǎn)移到肉堿上，可能是參與線(xiàn)粒體偶聯(lián)脂滴的重要分子。

第二步，確定PLIN2與CPT1A相互作用及其對(duì)脂滴/線(xiàn)粒體偶聯(lián)的影響

內(nèi)源Co-IP實(shí)驗(yàn)顯示，脂滴包被蛋白PLIN2與CPT1A結(jié)合（圖1b-c）。活細(xì)胞成像分析顯示，在葡萄糖剝奪時(shí)，CPT1A相關(guān)的線(xiàn)粒體被招募到PLIN2包被的脂滴上（圖1d）。敲減CPT1A阻斷了脂滴與線(xiàn)粒體之間的歐聯(lián)，同時(shí)葡萄糖剝奪的總脂滴增加（圖1e-f）。這些結(jié)果表明PLIN2和CPT1A的相互作用對(duì)脂滴與線(xiàn)粒體的結(jié)合以及隨后的脂滴水解至關(guān)重要。

第三步，葡萄糖剝奪，增強(qiáng)了PFKL與PLIN2結(jié)合，這對(duì)PLIN2和CPT1A互作、脂滴/線(xiàn)粒體的偶聯(lián)、脂滴脂解至關(guān)重要。

Co-IP分析發(fā)現(xiàn)，使用糖酵解代謝物處理葡萄糖剝奪的細(xì)胞不影響PLIN2與CPT1A的結(jié)合（圖1g），表明葡萄糖剝奪誘導(dǎo)的PLIN2和CPT1A互作與糖酵解代謝產(chǎn)物無(wú)關(guān)。

脂滴提取物質(zhì)譜分析顯示PFKL是一種脂滴相關(guān)蛋白（圖1a），在HCC中高表達(dá)。Co-IP實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，葡萄糖剝奪增強(qiáng)PFKL與PLIN2結(jié)合（圖1h）。免疫熒光顯示葡萄糖剝奪后PFKL與PLIN2共定位（圖1i）。IP-WB檢測(cè)顯示PFKL在葡萄糖缺乏條件下與脂滴結(jié)合（圖1j）。表明葡萄糖剝奪誘導(dǎo)PFKL與脂滴上的PLIN2結(jié)合。

另外，Co-IP分析提示，敲減PFKL抑制了葡萄糖剝奪誘導(dǎo)的PLIN2與CPT1A互作（圖1k）、脂滴和線(xiàn)粒體之間的系結(jié)（圖1l）以及總脂滴的減少（圖1m）。

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